大鼠腎臟P選擇素ELISA試劑盒的科研實(shí)驗(yàn)

    我們將近交5周齡190g～230g清潔級(jí)雄性Wister大鼠54只隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC組，n=18只)、糖尿病組(DM組，n=18只)和辛伐他汀治療組(S組，n=18只)。禁食12小時(shí)后，DM組和S組應(yīng)用鏈脲佐菌素(STZ)55mg/kg溶于PH4.3，0.1mmol/L的枸櫞酸緩沖液中一次性腹腔注射，NC組注射等體積的枸櫞酸緩沖液。72h后以連續(xù)三次隨機(jī)血糖≥16.7mmol/L為造模成功。各組于成模1周后給藥，S組給予2mg/kg/d辛伐他汀生理鹽水混懸液灌胃，NC組和DM組給予等體積生理鹽水灌胃。用藥后4周、8周、12周各組取6只大鼠，稱(chēng)重后分別用代謝籠收集24小時(shí)尿。清晨空腹麻醉后腔靜脈采血，分離血清，測(cè)定生化指標(biāo)。切取腎臟，去掉被膜，用濾紙吸干后稱(chēng)重。部分腎組織以10％中性福爾馬林固定，送病理檢查。分別用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和免疫組化法測(cè)大鼠4周、8周和12周血清及腎組織P-選擇素定量和定位表達(dá)；用放射免疫分析法測(cè)大鼠24h尿白蛋白排泄量。

   結(jié)果： 1．注射STZ72小時(shí)后，糖尿病組和辛伐他汀干預(yù)組大鼠血糖顯著增高，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；糖尿病組和辛伐他汀干預(yù)組大鼠空腹血胰島素水平顯著低于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；辛伐他汀干預(yù)組血糖及血胰島素與糖尿病組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

         2．4、8、12周時(shí)，與對(duì)照組比較，糖尿病組和辛伐他汀干預(yù)組大鼠24小時(shí)尿白蛋白排泄量增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與糖尿病組比較，辛伐他汀干預(yù)組大鼠24小時(shí)尿白蛋白排泄量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；糖尿病組24小時(shí)尿蛋白排泄量隨時(shí)間延長(zhǎng)增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

         3．光鏡下見(jiàn)，對(duì)照組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)基本正常。糖尿病組大鼠腎小球體積增大，伴系膜增生，腎小管管腔內(nèi)可見(jiàn)蛋白管型，間質(zhì)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，且隨時(shí)間延長(zhǎng)病變明顯。12周時(shí)腎小球體積無(wú)明顯縮小，未觀(guān)察到明顯腎小球硬化縮小。經(jīng)辛伐他汀治療后，上述腎臟病理改變改善，且隨時(shí)間延長(zhǎng)病變改善顯著。

           4．糖尿病組和辛伐他汀干預(yù)組大鼠血清可溶性P-選擇素水平較對(duì)照組組均顯著升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與糖尿病組比較，辛伐他汀干預(yù)組血清可溶性P-選擇素水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

           5．免疫組化顯示，對(duì)照組大鼠腎小球有少量P-選擇素表達(dá)，腎小管幾乎不表達(dá)。與對(duì)照組比較，糖尿病組和辛伐他汀干預(yù)組大鼠腎小球及腎小管-間質(zhì)P-選擇素表達(dá)增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與糖尿病組比較，辛伐他汀干預(yù)組P-選擇素表達(dá)降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)論：P-選擇素在糖尿病腎病的早期即可出現(xiàn)，且與尿白蛋白排泄量呈正相關(guān)，辛伐他汀通過(guò)降低糖尿病大鼠P-選擇素的表達(dá)，減輕腎臟炎癥反應(yīng)及微血栓的形成，減少糖尿病大鼠尿蛋白，進(jìn)而對(duì)腎臟起到保護(hù)作用。